Κιτ ανίχνευσης νουκλεϊκών οξέων για νέο κορωνοϊό (SARS-Cov-2).
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Fluμετάλλευμαscent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Νέο κιτ ανίχνευσης νουκλεϊκών οξέων (SARS-Cov-2) Coronavirus (Fluorescent RT-PCR Probe Method)
【Packaging specifications 】25 Τεστ/Κιτ
【Intended usηλικία】
Αυτό το κιτ χρησιμοποιείται για την ποιοτική ανίχνευση νουκλεϊκού οξέος από νέο κορωνοϊό σε ρινοφαρυγγικά επιχρίσματα, στοματοφαρυγγικά επιχρίσματα, μάκτρα πρόσθιων ρινικών επιχρισμάτων, ρινικά επιχρίσματα, ρινικές πλύσεις και ρινικές αναρροφήσεις από άτομα που είναι ύποπτα για COVID19 από τον ιατρό τους. Η ανίχνευση των γονιδίων ORF1ab και N του νέου κοροναϊού μπορεί να χρησιμοποιηθεί για επικουρική διάγνωση και επιδημιολογική παρακολούθηση της νέας λοίμωξης από κορωνοϊό.
【Principles of the procedure 】
Αυτό το κιτ έχει σχεδιαστεί για συγκεκριμένους ανιχνευτές TaqMan και ειδικούς εκκινητές σχεδιασμένους για τις αλληλουχίες γονιδίων ORF1ab και N του νέου κοροναϊού (SARS-Cov-2). Το διάλυμα αντίδρασης PCR περιέχει 3 σετ ειδικών εκκινητών και φθοριζόντων ανιχνευτών για ειδική ανίχνευση στόχων και ένα επιπλέον σύνολο ειδικών εκκινητών και ανιχνευτών φθορισμού χρησιμοποιείται ως εσωτερικός πρότυπος έλεγχος του κιτ για την ανίχνευση ενδογενών γονιδίων οικιακής φροντίδας.
Η αρχή της δοκιμής είναι ότι ο ειδικός ανιχνευτής φθορισμού χωνεύεται και αποικοδομείται από τη δραστηριότητα εξωνουκλεάσης του ενζύμου Taq στην αντίδραση PCR, έτσι ώστε η ομάδα φθορισμού αναφοράς και η ομάδα φθορισμού σβησμένου να διαχωρίζονται, έτσι ώστε το σύστημα παρακολούθησης φθορισμού να μπορεί να λάβει ένα φθορίζον σήμα και, στη συνέχεια, Μέσω του φαινομένου εμπλουτισμού της ενίσχυσης PCR, το σήμα φθορισμού του ανιχνευτή φθάνει μια καθορισμένη τιμή κατωφλίου-τιμή Ct (Κύκλος κατώφλι). Στην περίπτωση που δεν υπάρχει αμπλικόνιο στόχου, η ομάδα αναφοράς του ανιχνευτή είναι κοντά στην ομάδα σβέσης. Αυτή τη στιγμή, λαμβάνει χώρα η μεταφορά ενέργειας συντονισμού φθορισμού και ο φθορισμός της ομάδας αναφοράς σβήνει από την ομάδα σβέσης, έτσι ώστε το σήμα φθορισμού να μην μπορεί να ανιχνευθεί από το όργανο φθορισμού PCR.
Για την παρακολούθηση της χρήσης αντιδραστηρίων κατά τη διάρκεια της δοκιμής, το κιτ είναι εξοπλισμένο με θετικούς και αρνητικούς μάρτυρες: ο θετικός μάρτυρας περιέχει το ανασυνδυασμένο πλασμίδιο της θέσης στόχου και ο αρνητικός μάρτυρας είναι το απεσταγμένο νερό, το οποίο χρησιμοποιείται για την παρακολούθηση της περιβαλλοντικής ρύπανσης. Συνιστάται η ταυτόχρονη ρύθμιση θετικού και αρνητικού ελέγχου κατά τη δοκιμή.
【Main comπόνενts 】
| Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Componεντολές | |
| Name | Specκαταγραφής | Ποσity | Ποσity | |
| Θετικός έλεγχος | 180 μL/φιαλίδιο | 1 | 1 | Τεχνητά κατασκευασμένα πλασμίδια, Απεσταγμένο νερό |
| Αρνητικός έλεγχος | 180 μL/φιαλίδιο | 1 | 1 | Απεσταγμένο νερό |
| Μίγμα SARS-Cov-2 | 358,5 μL/φιαλίδιο | 1 | / | Ειδικά ζεύγη εκκινητών, ειδικοί ανιχνευτές φθορισμού ανίχνευσης, dNTPs, MgCl2, KCl, Tris-Hcl, Απεσταγμένο νερό κ.λπ. |
| Μίγμα ενζύμων | 16,5 μL/φιαλίδιο | 1 | / | Ένζυμα Taq, αντίστροφη μεταγραφάση, ένζυμα UNG κ.λπ. |
| Μίγμα SARS-Cov-2 (Λυοφιλοποιημένο) | 25 εξετάσεις/φιαλίδιο | / | 1 | Ειδικά ζεύγη εκκινητών, ειδικοί ανιχνευτές φθορισμού ανίχνευσης, dNTPs, ένζυμα Taq, αντίστροφη μεταγραφάση, απεσταγμένο νερό κ.λπ. |
| 2x Buffer | 375 μL/φιαλίδιο | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, Απεσταγμένο νερό κ.λπ. |
Σημείωμα:(1) Τα συστατικά σε διαφορετικά κιτ παρτίδων δεν μπορούν να αναμειχθούν ή να εναλλάσσονται.
(2) Προετοιμάστε το δικό σας αντιδραστήριο: Κιτ εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος.
【Storage conditions και expiration date 】
For BST-SARS-25:Μεταφορά και αποθήκευση στους -20±5℃ για μεγάλο χρονικό διάστημα.
For BST-SARS-DR-25:Μεταφορά σε θερμοκρασία δωματίου. Αποθηκεύστε στους -20±5℃ για μεγάλο χρονικό διάστημα.
Αποφύγετε τους επαναλαμβανόμενους κύκλους κατάψυξης-απόψυξης. Η περίοδος ισχύος ορίζεται προσωρινά για 12 μήνες.
Δείτε την ετικέτα για την ημερομηνία κατασκευής και χρήσης.
Μετά το πρώτο άνοιγμα, το αντιδραστήριο μπορεί να αποθηκευτεί στους -20±5 °C για όχι περισσότερο από 1 μήνα ή μέχρι το τέλος της περιόδου αντιδραστηρίου, όποια ημερομηνία και αν είναι πρώτη, για να αποφευχθούν οι επαναλαμβανόμενοι κύκλοι κατάψυξης-απόψυξης και ο αριθμός κατάψυξης του αντιδραστηρίου -Οι κύκλοι απόψυξης δεν πρέπει να υπερβαίνουν τις 6 φορές.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1.Εφαρμόσιμος τύπος δείγματος: Εκχυλισμένο διάλυμα νουκλεϊκού οξέος.
2. Αποθήκευση και μεταφορά δειγμάτων: Αποθηκεύστε στους -20±5℃ για 6 μήνες. Παγώστε και ξεπαγώστε τα δείγματα όχι περισσότερο από 6 φορές.
【Testing metπηλοφόρι】
1.Nucleic acid extraction
Επιλέξτε ένα κατάλληλο κιτ εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος για την εξαγωγή ιικού νουκλεϊκού οξέος και ακολουθήστε τις οδηγίες του αντίστοιχου κιτ. Συνιστάται η χρήση κιτ εκχύλισης και καθαρισμού νουκλεϊκού οξέος που παράγεται από την Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. ή ισοδύναμο κιτ καθαρισμού νουκλεϊκού οξέος.
2. Reaction αγώνισμαnt prepαραtion
2.1 For BST-SARS-25:
(1) Αφαιρέστε το μείγμα SARS-Cov-2 και το μείγμα ενζύμων, λιώστε τελείως σε θερμοκρασία δωματίου, αναμείξτε καλά με τη συσκευή Vortex και στη συνέχεια φυγοκεντρήστε για λίγο.
(2) 16,5 μΙ Μίγμα Ενζύμων προστέθηκαν σε 358,5 ΜΙ SARS-Cov-2 Mix και αναμίχθηκαν επιμελώς για να ληφθεί το μικτό διάλυμα αντίδρασης.
(3) Ετοιμάστε έναν καθαρό οκταδικό σωλήνα PCR 0,2 mL και σημειώστε τον με 15 uL του παραπάνω μικτού διαλύματος αντίδρασης ανά φρεάτιο.
(4) Προσθέστε 15 μL καθαρού διαλύματος νουκλεϊκού οξέος, τον θετικό μάρτυρα και τον αρνητικό μάρτυρα και καλύψτε προσεκτικά το καπάκι του οκταδικού σωλήνα.
(5) Ανακατέψτε καλά αναποδογυρίζοντας και φυγοκεντρήστε γρήγορα για να συγκεντρωθεί το υγρό στο κάτω μέρος του σωλήνα.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
(1) Προσθέστε 375 ul 2x ρυθμιστικό διάλυμα στο SARS-Cov-2 Mix((Λυοφιλοποιημένο) για να προετοιμάσετε το μείγμα αντίδρασης. Ανακατέψτε καλά με πιπέτα και στη συνέχεια φυγοκεντρήστε για λίγο. （Μόλις παρασκευαστεί το μείγμα αντίδρασης, συνιστάται η αποθήκευση στους -20℃ σε μακροχρόνια αποθήκευση.)
(2) Ετοιμάστε έναν καθαρό οκταδικό σωλήνα PCR 0,2 mL και σημειώστε τον με 15μL μίγματος αντίδρασης ανά φρεάτιο.
(3) Προσθέστε 15 μL καθαρού διαλύματος νουκλεϊκού οξέος, τον θετικό και τον αρνητικό μάρτυρα και καλύψτε προσεκτικά το καπάκι του οκταδικού σωλήνα.
(4) Ανακατέψτε καλά αναποδογυρίζοντας και φυγοκεντρήστε γρήγορα για να συγκεντρωθεί το υγρό στο κάτω μέρος του σωλήνα.
3. PCR amplification (Ανατρέξτε στο εγχειρίδιο του οργάνου για ρυθμίσεις λειτουργίας.)
3. 1 Τοποθετήστε τον 8-σωλήνα PCR στον θάλαμο δειγμάτων του οργάνου φθορίζουσας PCR και ρυθμίστε το δείγμα προς δοκιμή, τον θετικό μάρτυρα και τον αρνητικό μάρτυρα σύμφωνα με τη σειρά φόρτωσης.
3.2 Κανάλι ανίχνευσης φθορισμού:
(1) Το γονίδιο ORF1ab επιλέγει το κανάλι ανίχνευσης του FAM (Reporter: FAM, Quencher: None).
(2) Το γονίδιο N επιλέγει το κανάλι ανίχνευσης του VIC (Reporter: VIC, Quencher: None).
(3) Το εσωτερικό πρότυπο γονίδιο επιλέγει το κανάλι ανίχνευσης του CY5 (Reporter: CY5, Quencher: None).
(4) Η παθητική αναφορά έχει οριστεί σε ROX.
3.3 Ρύθμιση παραμέτρων προγράμματος PCR:
| Βήμα | Θερμοκρασία (℃) | Φορά | Αριθμός κύκλων | |
| 1 | Αντίστροφη αντίδραση μεταγραφής | 50 | 15 λεπτά | 1 |
| 2 | Ενεργοποίηση ενζύμου Taq | 95 | 2,5 λεπτά | 1 |
| 3 | Ενεργοποίηση ενζύμου Taq | 93 | 10 δευτ | 43 |
| Επέκταση ανόπτησης και απόκτηση φθορισμού | 55 | 30 δευτ | ||
Μετά τη ρύθμιση, αποθηκεύστε το αρχείο και εκτελέστε το πρόγραμμα αντίδρασης..
4.Results analysis
Μετά το τέλος του προγράμματος, τα αποτελέσματα αποθηκεύονται αυτόματα και αναλύεται η καμπύλη ενίσχυσης. Η καμπύλη ενίσχυσης ορίζεται στο προεπιλεγμένο όριο του οργάνου.
【Explanation of test results 】
1. Προσδιορίστε την εγκυρότητα του πειράματος: Το κανάλι θετικού μάρτυρα FAM, VIC θα πρέπει να έχει μια τυπική καμπύλη ενίσχυσης και η τιμή Ct είναι γενικά μικρότερη από 34, αλλά μπορεί να παρουσιάζει διακυμάνσεις λόγω διαφορετικών ρυθμίσεων κατωφλίου διαφορετικών οργάνων. Το κανάλι αρνητικού ελέγχου FAM, VIC θα πρέπει να είναι μη ενισχυμένο Ct. Συμφωνείται ότι οι παραπάνω προϋποθέσεις πρέπει να πληρούνται ταυτόχρονα, διαφορετικά η δοκιμή αυτή είναι άκυρη.
2. Κρίση αποτελέσματος
| Κανάλι FAM/VIC | Αποτέλεσμα κρίσης |
| Ct＜37 | Το δείγμα δοκιμής είναι θετικό |
| 37≤Ct＜40 | Η καμπύλη ενίσχυσης έχει σχήμα S και τα ύποπτα δείγματα πρέπει να επανεξεταστούν. εάν τα αποτελέσματα της επανεξέτασης είναι συνεπή, κρίνεται ως θετικό, διαφορετικά είναι αρνητικό |
| Ct≥40 Ή χωρίς ενίσχυση | Το δείγμα δοκιμής είναι αρνητικό (ή κάτω από το κατώτερο όριο ανίχνευσης κιτ) |
Σημείωση: (1) Εάν τόσο το κανάλι FAM όσο και το κανάλι VIC είναι θετικά ταυτόχρονα, το SARS-Cov-2 προσδιορίζεται ως θετικό.
(2) Εάν το κανάλι FAM ή το κανάλι VIC είναι θετικό και το άλλο κανάλι είναι αρνητικό, η δοκιμή θα πρέπει να επαναληφθεί. Εάν είναι ταυτόχρονα θετικό, θα κριθεί ως SARS-Cov-2 θετικό, διαφορετικά θα κριθεί ως SARS-Cov-2 αρνητικό.
Σχετικά προϊόντα
-
Κιτ ανίχνευσης αντισωμάτων IgM/IgG COVID-19
Κιτ ανίχνευσης αντισωμάτων COVID-19 （Μέθοδος ανοσοχρωματογραφίας κολλοειδούς χρυσού) s/kit 【 ΠΕΡΙΛΗΨΗ】 Οι νέοι κοροναϊοί ανήκουν στο γένος β. Το COVID-19 είναι μια οξεία λοιμώδης νόσος του αναπνευστικού. Οι άνθρωποι είναι γενικά επιρρεπείς. Επί του παρόντος, οι ασθενείς που έχουν μολυνθεί από τον νέο κορωνοϊό είναι η κύρια πηγή...
-
Κιτ εκχύλισης ή καθαρισμού νουκλεϊκού οξέος
Κιτ εκχύλισης ή καθαρισμού νουκλεϊκού οξέος ή αποθηκεύεται στους -20℃. Το δείγμα θα πρέπει να μεταφέρεται με κατεργασία 0℃. Εισαγωγή Το κιτ εκχύλισης ή καθαρισμού νουκλεϊκού οξέος (Μέθοδος Magnetic Beads) έχει σχεδιαστεί για τον αυτοματοποιημένο καθαρισμό RNA και DNA από σωματικά υγρά (όπως επιχρίσματα, πλάσμα, ορός) με τη χρήση αυτοματοποιημένων οργάνων εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος. Η τεχνολογία μαγνητικών σωματιδίων παρέχει DNA/RNA υψηλής ποιότητας που είναι κατάλληλο για ...
-
Κιτ δοκιμασίας αντιγόνου SARS-CoV-2 (Ανοσοχρωματογρ...
SARS-CoV-2 Antigen Assay Kit （Μέθοδος ανοσοχρωματογραφίας) Εγχειρίδιο προϊόντος 【ΟΝΟΜΑ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ】SARS-CoV-2 Antigen Assay Kit （Μέθοδος ανοσοχρωματογραφίας) 【ΠΡΟΔΙΑΓΡΑΦΕΣ ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑΣ】 1 Test/Kit για τον κορωνοϊό ανήκει στο γένος/ABSCT. Το COVID-19 είναι μια οξεία λοιμώδης νόσος του αναπνευστικού. Οι άνθρωποι είναι γενικά επιρρεπείς. Επί του παρόντος, οι ασθενείς που έχουν προσβληθεί από τον νέο κορωνοϊό είναι οι κύριοι...
-
Κιτ δοκιμασίας αντιγόνου SARS-CoV-2
Κιτ ανάλυσης αντιγόνου SARS-CoV-2 (Μέθοδος ανοσοχρωματογραφίας) Εγχειρίδιο προϊόντος 【ΟΝΟΜΑ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ】 Κιτ ανάλυσης αντιγόνου SARS-CoV-2 (Μέθοδος ανοσοχρωματογραφίας) 【ΠΡΟΔΙΑΓΡΑΦΕΣ ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑΣ】 1 Test/Kit/10Test TRACT】 Το Οι νέοι κοροναϊοί ανήκουν στο γένος β. Το COVID-19 είναι μια οξεία λοιμώδης νόσος του αναπνευστικού. Οι άνθρωποι είναι γενικά επιρρεπείς. Επί του παρόντος, οι ασθενείς που έχουν μολυνθεί από τον νέο κορωνοϊό είναι η κύρια πηγή μόλυνσης. ασυμπτωματικά μολυσμένα άτομα...